站点帮助

1．临诊诊断：（1）高致病性禽流感：爆发时家禽大批急性死亡，产蛋停止，呼吸道症状，头部、颜面部和颈部浮肿，无毛部皮肤（冠肉髯、脚部）发绀、肿、出血、坏死，白绿色下痢。（2）低致病性禽流感：无症状急性感染，死亡率为5%～15%，产蛋率下降5%～50%，呼吸道病变、气管水肿、干酪样渗出物、气囊炎，肾脏肿大、尿酸盐沉着。
仅根据临诊症状及剖检病变，很难确诊，必须进行实验室诊断。
    2．实验室诊断：（1）病毒分离：采取喉头、气管、肺、气囊、肝、脾、脑及直肠内容物等，置于加有青霉素10000单位/毫升，链霉素10000单位/毫升组织培养液或50%葡萄糖磷酸盐缓冲液中4℃保存或运输，不超过48小时。用上述溶液将病料制成10%乳剂-70℃保存或3000转/分离心5分钟，取上清液用0.2～0.45微米（220～450纳米）的滤膜过滤除菌，取滤液0.3毫升，尿囊腔接种9～11日龄SPF鸡胚，每份样品至少接种5个鸡胚。经37℃孵化4天（剔除接种后 24小时内死亡鸡胚），置于4℃ 6～12小时杀死鸡胚，吸取尿囊液，同时采取绒毛尿囊膜。尿囊液中若含有AIV时，HA试验呈阳性。若初代尿囊液HA试验呈阴性，需再传一代，取尿囊液1：10稀释接种0.3毫升/胚，再呈阴性则判断为AIV感染阴性反应；若呈阳性，用ND抗血清进行HI试验，若呈阴性反应时再结合以下血清学诊断可初步判定为AIV感染。（2）血清学诊断：利用AGP、ELISA方法可检测A型流感病毒共有的特异性抗体或抗原，已鉴定的标准AIV制备的抗原可用检测可疑鸡群的血清抗体（此步骤可在病毒分离前进行）。将上述病毒分离时采用的鸡胚尿囊膜用PBS（pH=7.2）洗净，排尽囊中液体，研磨乳剂，反复冻融3次，3000转/分，离心10分钟，取上清液，用终浓度0.1%的福尔马林经37℃36小时灭活，即可用作AGP抗原（3个膜可制做约1毫升抗原）。用已知的标准抗血清与其进行AGP试验，鉴定分离病毒。（3）病毒定型及定性：（H和N亚型）：确定亚型需用已定型（H1～H5，N1～N9）的一系列单特异性抗血清做HI试验，因此应交专门机构进行。（4）致病性（毒力）的测定：HPAIV的判定标准（美国家畜卫生协会）。
     ①取1：10稀释的感染尿囊液0.2毫升静脉接种8只4～8周龄SPF鸡，隔离饲养10天内死亡6只或6只以上（致死率75%以上）。
    ②致死率1～5/8（75%以下），H5或H7亚型以外的病毒，在不加胰蛋白酶细胞培养中可增殖，并可形成CPE或蚀斑。
    此外，也可测定ICPI（脑内接种致死指数）来判定致病性，出雏40小时SPF初生雏10只，脑内接种10个病毒，7天内观察记录死亡情况，测定ICPI值，在1.5～2.0者可判定为HPAIV。
   （5）基因诊断：利用基因扩增（PCR）方法直接检出病毒的基因，此方法较常规的病毒分离法速度快，特异性高，而且可克服因野外取料混有其他病毒造成的误诊。
一旦经病毒分离、血清学试验初步诊断为AI时，应立即报告国家有关兽医机构，并将分离的病毒或采集的病料报国家指定的机构进行确诊和定位。诊断过程中应严格执行防污染、防扩散的操作程序。